Sistemas de expresión de proteÃnas recombinantes
Además de las estrategias generales para optimizar la expresión de un gen recombinante, es importante elegir y/o diseñar un sistema de expresión adecuado.
Los sistemas que emplean proteÃnas de fusión son una alternativa para expresar proteÃnas recombinantes con alto rendimiento, siendo apropiados además por poseer esquemas de purificación simples. En estos sistemas, la purificación, detección y seguimiento en el proceso productivo son relativamente sencillos debido a la expresión de péptidos, polipéptidos o proteÃnas fusionados a la proteÃna recombinante de interés en el extremo N o C terminal. Además el uso de estos sistemas disminuye o evita la formación de cuerpos de inclusión (agregados proteicos depositados en el citoplasma bacteriano), mejora el plegamiento molecular y limita la degradación proteolÃtica. Algunas de las proteÃnas usadas en estos sistemas de expresión son: la proteÃna A de estafilococo, la proteÃna G de estreptococo, la glutatión-S-transferasa (GST) de Schistosoma japonicum y la proteÃna de unión a la maltosa.
Respecto a la recuperación y purificación del producto final, el mismo varÃa de acuerdo al sistema empleado, dependiendo de que la proteÃna recombinante sea secretada, intracelular, soluble o se encuentre en cuerpos de inclusión. En el caso particular del sistema pGEX, donde el producto recombinante es expresado como proteÃna de fusión con la enzima GST dentro del citoplasma, la purificación es efectuada por cromatografÃa de afinidad con glutatión agarosa. La especificidad del sistema y las condiciones poco desnaturalizantes en la que se produce la elución, lo hacen adecuado para uso en productos de aplicación en diagnóstico. Debido a que la GST es poco inmunogénica, podrÃa usarse la proteÃna de fusión entera, sin remover la porción GST, en reactivos para inmunodiagnóstico.
Autor: Blanca Velázquez
Basado en el trabajo de tesis de la MaestrÃa en BiotecnologÃa (Facultad de Ciencias, Universidad de la República; Uruguay).
Por favor me podria guiar un poco, necesito elaborar un sistema de expresion de proteinas reconbinantes que permitan producir INTERFERON GAMMA RECONBINANTE para utilización con humanos… Gracias!!
Estimada Estefania:
En los bancos de datos de patentes podrás encontrar información que pueda serte de utilidad para diseñar el sistema de expresión de proteÃnas recombinantes, en el caso que no desees comprar los sistemas comerciales que están disponibles en el mercado.
Atentos saludos.
Hola buenas tardes, me gustaria conocer algunos métodos para la cuantificación de proteinas recombinantes o si me pudieran proporcionar alguna página donde pudiese encontrar esa información les estaria muy agradecida.
Espero sus respuestas
saludos!! 😀
Estimada Anakaren:
La cuantificación de proteÃnas recombinantes no varÃa respecto a otras técnicas de cuantificación de proteÃnas. Según el grado de pureza que tengas y el tipo de proteÃna que deseas cuantificar puedes usar absorbancia a 280 nm, método de Lowry, Brafdorf o también puedes emplear método del ácido bicinconÃnico que actualmente está disponible en kit comercial por Pierce.
Puedes buscar información de cada uno estos métodos en internet, pudiendo elegir alguno de ellos dependiendo de las condiciones en que está la proteÃna ya sea recombinante o no recombinante.
Esperamos esta guÃa te sea de utilidad.
Saludos cordiales.
El equipo de Bioero.com
Hola necesito ayuda, estoy tratando de purificar una proteÃna, pero parece que toda la que se produce se queda en la parte insoluble de las bacterias, y necesito tenerla de manera nativa, me podrÃan ayudar, gracias
Estimada Mabel: Debes buscar un sistema para resolubilizar los cuerpos de inclusión y evaluar si la proteÃna soporta el sistema de resolubilización para el uso que la requieres.